ENX-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403611-ACT

L’EZH1 umano codifica la proteina del gruppo Polycomb ENX-2, una subunità catalitica del complesso PRC2 che deposita il marcatore istonico repressivo H3K27me3 per regolare la compattazione della cromatina e il silenziamento genico a lungo termine. ENX-2 contribuisce a controllare programmi trascrizionali specifici di linea durante lo sviluppo e la differenziazione, collegando la regolazione epigenetica al controllo del ciclo cellulare e al mantenimento dell’identità cellulare. Come parte di PRC2, EZH1 agisce insieme a partner fondamentali quali EED e SUZ12 per coordinare la repressione trascrizionale nei loci bersaglio di Polycomb. L’attività deregolata di PRC2 e le alterazioni dei profili di metilazione di H3K27 sono spesso oggetto di studio in biologia del cancro, nelle transizioni di stato delle cellule staminali e nella regolazione genica nello sviluppo neurobiologico, rendendo EZH1 un nodo rilevante per indagare i meccanismi epigenetici.

ENX-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EZH1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ENX-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EZH1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EZH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ENX-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EZH1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ENX-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ENX-2 nelle cellule tumorali con espressione di EZH1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.