Emx1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402711-NIC

EMX1 codifica per il fattore di trascrizione homeobox Emx1, una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e contribuisce a governare il patterning del telencefalo dorsale e la corticogenesi durante il neurosviluppo umano. Emx1 regola programmi di espressione genica legati alla specificazione del destino neuronale, alla proliferazione dei progenitori e all’identità regionale, integrandosi con reti trascrizionali più ampie che coordinano lo sviluppo del prosencefalo. L’alterazione dei circuiti regolatori associati a EMX1 è rilevante per lo studio dei meccanismi alla base di fenotipi neuroevolutivi e di una modificata organizzazione corticale, e EMX1 è spesso utilizzato come locus di riferimento per valutare le prestazioni dell’ingegneria genomica in cellule umane. In quanto fattore di trascrizione nucleare, Emx1 rappresenta un modello maneggevole per indagare come i programmi trascrizionali dello sviluppo plasmino le transizioni di stato cellulare e le decisioni di linea cellulare.

Emx1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EMX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EMX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EMX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EMX1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.