Eme1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403404-ACT

ヒトのEME1は、構造特異的エンドヌクレアーゼであるEme1をコードしており、MUS81–EME1複合体を形成して、DNA複製や相同組換えの過程で生じるホリデイジャンクションやその他の分岐DNA中間体を解消します。このヌクレアーゼ活性は、複製フォークの再開、停止または崩壊したフォークの処理、そしてゲノム安定性の維持を支え、EME1をS期チェックポイントの協調やDNA損傷応答経路と結び付けています。MUS81–EME1依存的なDNA修復の制御異常は、多くのがんに共通する特徴である染色体不安定性を増大させ得るため、複製ストレスや遺伝毒性ストレスに対する感受性を規定する機構の研究において重要です。

Eme1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EME1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Eme1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EME1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEME1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Eme1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEME1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEme1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEME1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEme1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。