Elastase-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402707-ACT

Il gene umano CELA1 codifica l’elastasi-1, una proteasi sierinica secreta che catalizza il rimodellamento proteolitico dei componenti della matrice extracellulare e contribuisce al processamento regolato di peptidi nei tessuti mucosali e ghiandolari. L’attività dell’elastasi-1 si inserisce nell’equilibrio proteasi–antiproteasi, nella segnalazione infiammatoria e nei processi di rimodellamento tissutale che influenzano l’integrità epiteliale e le interazioni con lo stroma. Un’attività dell’elastasi deregolata è stata associata a degradazione patologica della matrice e a microambienti infiammatori cronici, rendendo CELA1 rilevante per studi sul rimodellamento delle vie aeree, sulla proteolisi associata alla fibrosi e sul crosstalk tumore–stroma. In quanto proteasi legata alla digestione e alle funzioni di barriera, CELA1 è utile anche per studiare la dinamica della via secretoria e le reti di segnalazione guidate dalle proteasi.

Elastase-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CELA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Elastase-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CELA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CELA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Elastase-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CELA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Elastase-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Elastase-1 nelle cellule tumorali con espressione di CELA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.