Plásmido CRISPR de Activación (h) Elastase-1: sc-402707-ACT

El CELA1 humano codifica la elastasa-1, una proteasa serínica secretada que cataliza la remodelación proteolítica de componentes de la matriz extracelular y contribuye al procesamiento regulado de péptidos en tejidos mucosos y glandulares. La actividad de la elastasa-1 se relaciona con el equilibrio proteasa–antiproteasa, la señalización inflamatoria y los procesos de remodelación tisular que influyen en la integridad epitelial y en las interacciones con el estroma. La desregulación de la actividad elastasa se ha asociado con degradación patológica de la matriz y microambientes inflamatorios crónicos, lo que hace que CELA1 sea relevante para estudios de remodelación de las vías respiratorias, proteólisis asociada a fibrosis y comunicación cruzada tumor–estroma. Como proteasa vinculada a funciones digestivas y de barrera, CELA1 también es útil para investigar la dinámica de la vía secretora y redes de señalización impulsadas por proteasas.

Elastase-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CELA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Elastase-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CELA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CELA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Elastase-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CELA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Elastase-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Elastase-1 en células tumorales con expresión de CELA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.