Egr-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401203-NIC

EGR2 codifica Egr-2, un fattore di trascrizione a dita di zinco rapidamente indotto da segnali extracellulari, che programma le decisioni sul destino cellulare e le risposte trascrizionali a lungo termine. Nelle cellule umane, Egr-2 regola reti geniche coinvolte nello sviluppo e nella mielinizzazione dei nervi periferici, nella differenziazione e tolleranza delle cellule immunitarie e nel rimodellamento trascrizionale dipendente dall’attività. Interagisce con la segnalazione dei geni immediate early guidata da MAPK/ERK e modula la cromatina e l’occupazione dei promotori su bersagli specifici di linea cellulare. Un’attività di EGR2 disregolata e programmi trascrizionali downstream alterati sono stati associati a neuropatie ereditarie e acquisite, nonché a disfunzioni immunitarie, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della regolazione genica neuro‑immunitaria.

Egr-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EGR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EGR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EGR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EGR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.