EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400413

Panoramica

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica un recettore accoppiato a proteine G per la sfingosina-1-fosfato (S1P) che traduce i segnali lipidici extracellulari in programmi intracellulari che controllano la migrazione cellulare, la sopravvivenza e la funzione di barriera. Attraverso l’accoppiamento a Gi e a effettori a valle quali PI3K–AKT, MAPK/ERK e le GTPasi della famiglia Rho, S1PR1 regola la dinamica del citoscheletro, l’adesione e la permeabilità endoteliale. È un nodo centrale della biologia della via dell’S1P che influenza lo sviluppo vascolare e il traffico delle cellule immunitarie, e la sua disregolazione è implicata nella disfunzione vascolare associata all’infiammazione e nel rimodellamento del microambiente tumorale. In quanto recettore di membrana con output di segnalazione dipendenti dal contesto, S1PR1 è ampiamente studiato in modelli di angiogenesi, uscita (egress) dei leucociti e omeostasi endoteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-1/S1P1/S1PR1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S1PR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S1PR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S1PR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EDG-1/S1P1/S1PR1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S1PR1 per lo studio della segnalazione di EDG-1/S1P1/S1PR1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni S1PR1 critici per la funzione di EDG-1/S1P1/S1PR1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S1PR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S1PR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EDG-1/S1P1/S1PR1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S1PR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S1PR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.