EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400413

概要

S1PR1（EDG-1/S1P1）は、スフィンゴシン-1-リン酸（S1P）に対するGタンパク質共役型受容体（GPCR）をコードし、細胞外の脂質シグナルを、細胞移動・生存・バリア機能を制御する細胞内プログラムへと変換する。Giとの共役と、PI3K–AKT、MAPK/ERK、RhoファミリーGTPアーゼなどの下流エフェクターを介して、S1PR1は細胞骨格ダイナミクス、接着、ならびに内皮透過性を調節する。S1P経路の生物学における中枢的なノードであり、血管発生や免疫細胞トラフィッキングに影響を与えるほか、その制御異常は炎症に伴う血管機能障害や腫瘍微小環境のリモデリングに関与するとされる。膜受容体として、状況依存的に異なるシグナル出力を示すことから、S1PR1は血管新生、白血球の組織外遊出、内皮恒常性のモデルで広く研究されている。

EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるS1PR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、S1PR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、S1PR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EDG-1/S1P1/S1PR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EDG-1/S1P1/S1PR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、S1PR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EDG-1/S1P1/S1PR1の機能に不可欠なS1PR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、S1PR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、S1PR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EDG-1/S1P1/S1PR1 HDRプラスミド（h）および EDG-1/S1P1/S1PR1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはS1PR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のS1PR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。