EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400413

Visão geral

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica um receptor acoplado à proteína G para a esfingosina-1-fosfato (S1P) que converte a sinalização lipídica extracelular em programas intracelulares que controlam a migração celular, a sobrevivência e a função de barreira. Por meio do acoplamento à Gi e de efetores a jusante como PI3K–AKT, MAPK/ERK e GTPases da família Rho, o S1PR1 regula a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e a permeabilidade endotelial. É um nó central na biologia da via da S1P que influencia o desenvolvimento vascular e o tráfego de células imunes, sendo que a desregulação está implicada em disfunção vascular associada à inflamação e na remodelação do microambiente tumoral. Como receptor de membrana com saídas de sinalização dependentes do contexto, o S1PR1 é amplamente estudado em modelos de angiogênese, egresso de leucócitos e homeostase endotelial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EDG-1/S1P1/S1PR1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene S1PR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do S1PR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do S1PR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EDG-1/S1P1/S1PR1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de S1PR1 para a investigação da sinalização de EDG-1/S1P1/S1PR1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) S1PR1 críticos para a função EDG-1/S1P1/S1PR1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos S1PR1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus S1PR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EDG-1/S1P1/S1PR1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia S1PR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo S1PR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.