EAAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400917

Panoramica

SLC1A3 codifica per il trasportatore di aminoacidi eccitatori 1 (EAAT1), un trasportatore di glutammato/aspartato ad alta affinità e dipendente dal sodio, arricchito negli astrociti, che favorisce la rimozione del glutammato extracellulare. Accoppiando l’ingresso del glutammato ai gradienti ionici, EAAT1 contribuisce a mantenere la trasmissione sinaptica, regola l’accoppiamento metabolico neurone–glia e limita la segnalazione eccitotossica, contribuendo al contempo all’equilibrio redox grazie alla disponibilità di glutammato per la sintesi del glutatione. L’attività di EAAT1 si integra con la neurotrasmissione glutammatergica, con i programmi omeostatici degli astrociti e con le vie che controllano il buffering degli ioni extracellulari e il riciclo dei neurotrasmettitori. Alterazioni della funzione o dell’espressione di SLC1A3 sono state associate a fenotipi neurosviluppo e neurodegenerativi, inclusi l’atassia episodica e una maggiore suscettibilità al danno eccitotossico, rendendolo rilevante per studi sulla stabilità dei circuiti del SNC e sulla biologia della glia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC1A3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC1A3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC1A3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EAAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC1A3 per lo studio della segnalazione di EAAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC1A3 critici per la funzione di EAAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC1A3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EAAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EAAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC1A3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EAAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EAAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC1A3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC1A3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.