Plasmide CRISPR d'Activation (h) E-Selectin/CD62E/SELE: sc-400452-ACT

SELE code pour l’E-sélectine (CD62E), une molécule d’adhérence endothéliale inductible qui est rapidement surexprimée sous l’effet de cytokines inflammatoires telles que le TNF-α et l’IL-1β via des voies de signalisation dépendantes de NF-κB et des MAPK. L’E-sélectine exprimée à la surface cellulaire assure l’accrochage initial et le roulement des leucocytes sur un endothélium activé en se liant à des ligands sialylés et fucosylés, coordonnant ainsi l’extravasation leucocytaire lors de l’inflammation aiguë et chronique. Cette cascade d’adhérence s’entrecroise avec des programmes d’activation vasculaire qui influencent la perméabilité endothéliale, la présentation de cytokines/chimiokines et, en aval, l’arrêt ferme médié par les intégrines. Une expression dérégulée de SELE est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation vasculaire et de dysfonction endothéliale pertinents pour l’athérosclérose, les lésions d’ischémie-reperfusion, l’inflammation auto-immune et l’angiogenèse associée aux tumeurs.

E-Selectin/CD62E/SELE Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SELE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E-Selectin/CD62E/SELE Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SELE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SELE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E-Selectin/CD62E/SELE. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SELE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E-Selectin/CD62E/SELE au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E-Selectin/CD62E/SELE dans les cellules tumorales présentant une expression de SELE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.