Dynein IC2, cytosolic Double Nickaseプラスミド (h): sc-402079-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Dynein IC2, cytosolic Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Dynein IC2, cytosolicダブルニカースプラスミド（h）およびDynein IC2, cytosolicダブルニカースプラスミド（h2）は、DYNC1I2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Dynein IC2, cytosolic Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402079-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dynein IC2, cytosolic Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402079-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DYNC1I2 は、細胞質ダイニン1の中間鎖2（Dynein IC2）をコードしており、ダイニンをダイナクチンおよび多様なカーゴアダプターに結び付ける、マイナス端方向性の微小管モーター複合体の中核サブユニットです。このモーター系は、エンドソーム、リソソーム、ゴルジ体由来小胞の細胞内輸送に加え、中心体の位置決め、有糸分裂紡錘体の編成、神経細胞の恒常性に必要な逆行性輸送を担います。Dynein IC2 の機能は、微小管依存性輸送、細胞周期進行、オルガネラ動態といった経路と統合的に働き、極性形成やプロテオスタシスに影響します。ダイニン－ダイナクチン機構の異常は、軸索輸送不全や有糸分裂の忠実性低下に関連する神経発達・神経変性表現型、その他の疾患にも関与するとされており、DYNC1I2 は機序解明研究に有用な結節点となります。
Dynein IC2, cytosolic ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DYNC1I2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DYNC1I2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DYNC1I2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DYNC1I2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。