Duffy CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406288-ACT

ACKR1は、Duffy抗原／ケモカイン受容体をコードする遺伝子であり、赤血球および細静脈内皮細胞に高発現する非典型的ケモカイン受容体で、CCL2やCXCL8などの炎症性ケモカインおよび関連リガンドに結合します。Duffyはケモカインの「シンク」および輸送体として機能することで、ケモカイン勾配、白血球トラフィッキング、ならびに血管微小環境における炎症トーンを調節します。ACKR1発現の変動は、ケモカイン恒常性、内皮生物学、赤血球表面抗原の制御を研究するためのモデルとして広く用いられており、炎症関連の表現型や血液学的形質とも関連します。これらの機能により、ACKR1は細胞移動、サイトカイン／ケモカインシグナル伝達、血管炎症を制御する、より広範な免疫シグナルネットワークと結び付いています。

Duffy CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACKR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Duffy CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACKR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACKR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Duffyの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACKR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDuffy依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACKR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDuffy経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。