DRP1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-428678-ACT

マウスのDnm1lは、ダイナミン関連タンパク質1（DRP1）をコードしている。DRP1は大型GTPアーゼで、細胞小器官膜上に集合し、GTP依存的に膜を収縮させることで、ミトコンドリアおよびペルオキシソームの分裂を統括する。DRP1はリン酸化、SUMO化、ユビキチン化といった修飾シグナルを統合し、分裂ダイナミクスを細胞のエネルギー状態、Ca2+恒常性、活性酸素（ROS）の制御と結び付ける。ミトコンドリアネットワークのリモデリングにおける中心的役割を通じて、DRP1はマイトファジー、アポトーシス感受性、細胞周期進行に影響を与えるため、Dnm1lの制御は神経変性、心代謝ストレス、炎症、がん細胞の適応に関する研究において重要性が高い。DRP1活性の攪乱は、PINK1/Parkin関連マイトファジーやストレス応答性キナーゼシグナル伝達などを含む、バイオエネルゲティクスおよび小器官品質管理経路の変化としばしば関連付けられる。

DRP1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Dnm1lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DRP1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Dnm1l 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDnm1l転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DRP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDnm1l遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDRP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDnm1l発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDRP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。