Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DRAK2 Plasmide Double Nickase (m): sc-430202-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DRAK2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DRAK2 Double Nickase Plasmid (m) e il DRAK2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Stk17b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DRAK2 Antibody (C-2): sc-398324
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DRAK2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430202-NIC | 20 µg | $410.00 |
Stk17b codifica DRAK2 (DAPK-related apoptosis-inducing kinase 2), una chinasi serina/treonina che modula le soglie di segnalazione dei linfociti e le decisioni sul destino cellulare in risposta allo stress. Nelle cellule immunitarie murine, DRAK2 è stata collegata alla regolazione della segnalazione del calcio indotta dal recettore dei linfociti T e dei programmi trascrizionali a valle che influenzano attivazione, anergia e apoptosi. Integrando la segnalazione chinasica con processi mitocondriali e del citoscheletro, DRAK2 può influire su proliferazione e sopravvivenza in contesti ematopoietici. Un’attività deregolata di STK17B/DRAK2 è stata associata a disfunzioni immunitarie e a meccanismi di malattie infiammatorie, a supporto del suo impiego come nodo per lo studio del controllo della segnalazione in immunologia e nella ricerca sulla morte cellulare.
DRAK2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Stk17b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Stk17b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Stk17b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Stk17b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.