Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) DOCK 8: sc-401727-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DOCK 8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DOCK 8 Double Nickase (h) et le plasmide DOCK 8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DOCK8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DOCK 8 Antibody (G-2): sc-376911
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DOCK 8 | sc-401727-NIC | 20 µg | $410.00 |
DOCK8 code pour « dedicator of cytokinesis 8 », un facteur d’échange de nucléotides de guanine atypique qui régule les GTPases de la famille Rho afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la polarité cellulaire et l’intégration des signaux en aval des récepteurs immunitaires. DOCK8 soutient la migration des lymphocytes, la formation de la synapse immunologique et la survie cellulaire, reliant la dynamique du cytosquelette aux voies qui contrôlent l’adhésion et le trafic vésiculaire. Les variants perte de fonction perturbent le contrôle du cytosquelette dans les cellules hématopoïétiques et sont associés à des phénotypes d’immunodéficience primitive caractérisés par une altération des réponses antivirales et une dérégulation de l’homéostasie immunitaire. En tant que nœud de signalisation reliant les entrées des récepteurs à des processus dépendants de l’actine, DOCK8 est largement étudié en biologie des leucocytes, dans les interactions hôte–pathogène et dans le développement des cellules immunitaires.
DOCK 8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DOCK8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DOCK8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DOCK8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DOCK8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.