Dnmt3a Plasmide Double Nickase (h): sc-400323-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dnmt3a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dnmt3a Double Nickase Plasmid (h) e il Dnmt3a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNMT3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dnmt3a Antibody (C-12): sc-365769
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dnmt3a Plasmide Double Nickase (h) | sc-400323-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dnmt3a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400323-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNMT3A codifica Dnmt3a, una DNA metiltransferasi de novo che stabilisce i pattern di metilazione dei CpG durante lo sviluppo e l’impegno del destino cellulare, modulando l’accessibilità della cromatina e programmi trascrizionali a lungo termine. Dnmt3a coopera con DNMT3B per l’instaurazione della metilazione e con DNMT1 per il mantenimento durante la replicazione del DNA, integrandosi con vie di rimodellamento epigenetico che influenzano la stabilità del genoma e il silenziamento dei trasposoni. Un’alterata funzione di DNMT3A è associata a una differenziazione ematopoietica deregolata e a un’ampia riprogrammazione epigenomica; inoltre, varianti somatiche ricorrenti sono spesso studiate in modelli di neoplasie mieloidi. In quanto regolatore chiave del controllo genico dipendente dalla metilazione, DNMT3A è comunemente analizzato nella biologia delle cellule staminali, nella maturazione delle cellule immunitarie e nella ricerca sull’epigenetica del cancro.
Dnmt3a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNMT3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNMT3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNMT3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNMT3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.