Dnmt1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400272-NIC

DNMT1 codifica la DNA (citosina-5)-metiltransferasi 1 (Dnmt1), la principale metiltransferasi di mantenimento che copia i pattern di metilazione dei CpG durante la replicazione del DNA e contribuisce a preservare l'identità epigenetica della cellula. Dnmt1 opera nell'ambito della regolazione della cromatina accoppiata alla replicazione, interagendo con fattori quali UHRF1 e PCNA per riconoscere il DNA emimetilato e coordinare la metilazione con la dinamica dei nucleosomi. Attraverso la regolazione dell'imprinting, l'inattivazione del cromosoma X e il silenziamento dei trasposoni, DNMT1 influenza la stabilità del genoma, la specificazione di linea e i programmi trascrizionali. Un'attività di DNMT1 deregolata e alterazioni del paesaggio di metilazione del DNA sono ampiamente associate a un silenziamento genico aberrante e a stati della cromatina anomali osservati in numerosi tumori e in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi.

Dnmt1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNMT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNMT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNMT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNMT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.