DMPK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402727-ACT

ヒトDMPK（筋強直性ジストロフィー・プロテインキナーゼ）遺伝子は、筋組織に豊富に発現するセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、細胞骨格の構築、細胞接着、筋芽細胞分化の制御に関与するとされています。DMPK活性はアクチン–ミオシンの動態や、筋の興奮性および構造的完全性を協調させるシグナル伝達ネットワークと連動し、収縮や細胞リモデリングといった過程を支えます。DMPK座位におけるCTGリピートの病的伸長は筋強直性ジストロフィー1型と遺伝学的に関連しており、RNAを介した制御異常が選択的スプライシングや筋機能に広範な影響を及ぼすことが知られています。これらの特性により、DMPKは筋生物学におけるキナーゼシグナル、神経筋病態生理、ならびに疾患関連座位での転写制御を研究するうえで重要な標的となります。

DMPK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DMPKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DMPK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DMPK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDMPK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DMPKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDMPK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDMPK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDMPK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDMPK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。