Dicer Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400365-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DicerO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Dicer (h) e o Plasmídeo Double Nickase Dicer (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DICER1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Dicer Anticorpo (F-10): sc-136979
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Dicer Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400365-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dicer Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400365-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DICER1 codifica a Dicer, uma endonuclease RNase III essencial para a biogénese de microRNAs e siRNAs, através do processamento de estruturas em grampo precursoras em pequenos RNAs de ~21–23 nt. Ao carregar esses pequenos RNAs em complexos RISC contendo Argonaute, a Dicer regula o silenciamento génico pós-transcricional e afeta vias que controlam a diferenciação, a proliferação e as respostas ao stress. Redes de pequenos RNAs dependentes de DICER1 influenciam a estabilidade do genoma e a sinalização imunitária inata por meio da modulação da atividade de elementos repetitivos e das respostas a quebras de dupla cadeia. A desregulação ou mutação de DICER1 perturba a homeostase de microRNAs e está associada a programas de expressão génica alterados em múltiplos contextos de doença, tornando-o um alvo fundamental para estudos mecanísticos de interferência por RNA e controlo do transcriptoma.
Dicer O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DICER1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DICER1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DICER1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DICER1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.