Dia 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401929-NIC

DIAPH1 codifica la proteina formina Dia1, un fattore di nucleazione e allungamento dell’actina che coordina il rimodellamento del citoscheletro a valle della segnalazione di RhoA. Dia1 sostiene l’assemblaggio lineare dell’F-actina, la formazione delle fibre di stress e la stabilizzazione dei microtubuli, influenzando così la polarità cellulare, l’adesione, la citocinesi e la migrazione direzionale. Attraverso i suoi ruoli nella dinamica del citoscheletro e nella meccanotrasduzione, DIAPH1 contribuisce a regolare processi come la divisione cellulare e l’architettura dei tessuti. Un’attività alterata di DIAPH1 è stata associata a fenotipi patologici umani, tra cui ipoacusia neurosensoriale e trombocitopenia, ed è spesso studiato in contesti in cui la motilità e la proliferazione dipendenti dall’actina risultano disregolate.

Dia 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DIAPH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DIAPH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DIAPH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DIAPH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.