Desmuslin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409241-ACT

O gene **SYNM** codifica a desmuslina (sinemina), uma grande proteína associada a filamentos intermédios que se integra com a desmina e outras redes do citoesqueleto para estabilizar a arquitetura de células musculares e não musculares. A desmuslina dá suporte ao alinhamento dos sarcómeros, à organização das adesões focais e à mecanotransdução ao ligar os filamentos intermédios a estruturas de membrana e contráteis, influenciando assim a forma celular, a migração e as respostas ao stress. Em tecidos humanos, a expressão de **SYNM** é enriquecida no músculo estriado e contribui para a integridade do arcabouço miofibrilar e dos complexos de sinalização do citoesqueleto. A função desregulada da sinemina/desmuslina e alterações na dinâmica dos filamentos intermédios têm sido associadas a fenótipos miopáticos e à remodelação do citoesqueleto observadas em contextos de doença do músculo cardíaco e esquelético, tornando **SYNM** um nó útil para estudar vias de sinalização estrutural.

Desmuslin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYNM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Desmuslin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYNM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYNM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Desmuslin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYNM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Desmuslin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Desmuslin em células tumorais com expressão de SYNM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.