DEPP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409806-ACT

C10orf10 は、プロゲステロンによって誘導される脱落膜タンパク質（DEPP）をコードしており、低酸素や栄養制限下で誘導されるストレス応答性因子として知られています。DEPP は酸化ストレスやオートファジー関連プログラムの制御に関与するとされ、活性酸素種（ROS）の調節や低酸素条件下での生存といった、代謝シグナル伝達およびレドックス恒常性と交差する細胞適応経路との関連が報告されています。さらに、組織リモデリングや炎症を伴うさまざまな状況で DEPP レベルの変化が報告されており、腫瘍生物学や代謝性疾患の機序研究においても、その制御異常が検討されています。これらの特性により、DEPP はストレス適応の転写制御や、オートファジーフラックス、ミトコンドリア機能、細胞生存率といった下流表現型を解析するための有用な標的となります。

DEPP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C10orf10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DEPP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C10orf10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC10orf10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DEPPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC10orf10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDEPP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC10orf10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDEPP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。