DDX60L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413888-ACT

DDX60L (elicasi DEAD-box 60-like) è un’elicasi dell’RNA umana coinvolta nella difesa antivirale innata, con un ruolo nel riconoscimento citosolico dell’RNA e nei programmi genici stimolati dall’interferone. È associata alla regolazione del metabolismo dell’RNA e delle vie di segnalazione dei recettori di tipo RIG-I, che modellano le risposte dell’interferone di tipo I e le reti trascrizionali a valle. In quanto fattore inducibile dall’interferone, DDX60L è spesso studiata nel contesto delle interazioni ospite–patogeno e della segnalazione infiammatoria. La disregolazione delle vie dell’interferone e del sensing dell’RNA è rilevante per la biologia delle infezioni e per i meccanismi delle malattie immunomediate, sostenendo l’indagine sul controllo, dipendente da DDX60L, della replicazione virale e delle risposte citochiniche.

DDX60L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DDX60L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DDX60L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DDX60L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DDX60L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDX60L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DDX60L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDX60L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDX60L nelle cellule tumorali con espressione di DDX60L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.