DDX33 Plasmide Double Nickase (m): sc-432143-NIC

Il gene murino **Dhx33** codifica **DDX33**, un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAD-box implicata nel rimodellamento, dipendente dall’ATP, di complessi RNA–proteina che supportano il metabolismo dell’RNA e la traduzione. DDX33 è stata associata alla biogenesi dei ribosomi e alla funzione nucleolare, influenzando il processamento dell’rRNA e la capacità di sintesi proteica durante la crescita cellulare e l’adattamento allo stress. Attraverso queste attività, DDX33 si intreccia con vie che controllano la proliferazione e gli output della segnalazione immunitaria innata che dipendono da un processamento dell’RNA finemente regolato. La disregolazione della funzione delle elicasi dell’RNA è ampiamente rilevante per programmi oncogenici e fenotipi infiammatori, rendendo Dhx33 un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo, centrato sull’RNA, dello stato cellulare.

DDX33 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dhx33 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dhx33. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dhx33. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dhx33 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.