DDB2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401686-NIC

DDB2 codifica un fattore di riconoscimento del danno al DNA che, in associazione con DDB1, forma il complesso UV-DDB, un sensore chiave delle fotolesioni indotte dai raggi UV che avvia la riparazione per escissione di nucleotidi (NER) a livello dell’intero genoma. Tramite l’accoppiamento al macchinario della ligasi E3 dell’ubiquitina CUL4A–RBX1, DDB2 promuove la verifica della lesione e il rimodellamento della cromatina ubiquitinando substrati associati alla riparazione, facilitando così il reclutamento dei componenti NER a valle. L’attività di DDB2 si interseca con il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare e con le vie della stabilità genomica, collegando un riconoscimento difettoso del danno a un aumento del carico mutazionale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di DDB2 sono state associate a fenotipi di sensibilità ai raggi UV e sono state studiate nel contesto della carcinogenesi e dei disturbi correlati alla riparazione del DNA.

DDB2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.