DDB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402067-NIC

DDB1 (proteina 1 di legame al DNA specifica per il danno) è un adattatore fondamentale del complesso ligasi E3 dell’ubiquitina CRL4 (CUL4–RBX1) che recluta diversi recettori di substrato per controllare il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Nelle cellule umane, DDB1 coordina vie di mantenimento del genoma, tra cui la riparazione per escissione di nucleotidi, le risposte allo stress replicativo e il controllo dei checkpoint, modulando la stabilità di fattori coinvolti nel riconoscimento del danno al DNA e nella progressione del ciclo cellulare. Attraverso queste funzioni, DDB1 contribuisce a preservare l’integrità della cromatina e l’omeostasi trascrizionale in condizioni di stress genotossico. La disregolazione delle reti di ubiquitinazione legate a DDB1 è stata associata a una capacità di riparazione del DNA alterata e a fenotipi proliferativi rilevanti per gli studi di biologia del cancro e di stabilità genomica.

DDB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.