Plásmido Doble Nickase (m) DAP12: sc-423568-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)DAP12 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DAP12 (m) y el plásmido de doble nickasa DAP12 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tyrobp. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DAP12 Anticuerpo (A-4): sc-166084
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) DAP12 | sc-423568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) DAP12 | sc-423568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tyrobp codifica DAP12 (TYROBP), un adaptador transmembrana que contiene un motivo de activación basado en tirosina de los inmunorreceptores (ITAM) y que acopla múltiples receptores activadores en células mieloides a la señalización intracelular. En la microglía, los macrófagos, las células dendríticas y las células del linaje osteoclástico de ratón, DAP12 se asocia con receptores como TREM2, SIRPβ1 y otros receptores tipo inmunoglobulina para promover cascadas dependientes de SYK que regulan la fagocitosis, la producción de citocinas, la quimiotaxis, la supervivencia y la remodelación del citoesqueleto. Este eje de señalización se interseca con vías de inmunidad innata, incluidas las respuestas mediadas por FcR y la señalización PI3K–AKT y MAPK, modulando el tono inflamatorio y la vigilancia tisular. La actividad alterada de la red TYROBP/DAP12 se estudia ampliamente en contextos como la neuroinflamación y las transiciones de estado de la microglía, la defensa del huésped y los trastornos de la remodelación ósea.
DAP12 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tyrobp en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tyrobp. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tyrobp. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tyrobp alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.