DAP12 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423568-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DAP12O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DAP12 (m) e o Plasmídeo Double Nickase DAP12 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Tyrobp. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DAP12 Anticorpo (A-4): sc-166084
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DAP12 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-423568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP12 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-423568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tyrobp codifica a DAP12 (TYROBP), um adaptador transmembranar que contém um motivo de ativação baseado em tirosina de imunorreceptor (ITAM) e que conecta múltiplos receptores ativadores em células mieloides à sinalização intracelular. Na microglia murina, em macrófagos, células dendríticas e células da linhagem de osteoclastos, a DAP12 associa-se a receptores como TREM2, SIRPβ1 e outros receptores do tipo Ig para promover cascatas dependentes de SYK que regulam a fagocitose, a produção de citocinas, a quimiotaxia, a sobrevivência e a remodelação do citoesqueleto. Esse eixo de sinalização interage com vias da imunidade inata, incluindo respostas mediadas por FcR e a sinalização PI3K–AKT e MAPK, modulando o grau de inflamação e a vigilância tecidual. Alterações na atividade da rede TYROBP/DAP12 são amplamente estudadas em contextos como neuroinflamação e transições de estado da microglia, defesa do hospedeiro e distúrbios de remodelação óssea.
DAP12 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tyrobp em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tyrobp. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tyrobp. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tyrobp interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.