D54 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425948

Panoramica

Tpd52l2 codifica D54, un membro della famiglia delle proteine tumorali D52 implicata nella regolazione del traffico vescicolare, della dinamica delle membrane e dei processi secretori che influenzano la crescita e la differenziazione cellulare. D54 è stata collegata a vie che governano il trasporto intracellulare e l’organizzazione del citoscheletro, supportando la consegna coordinata di componenti di segnalazione e proteine di membrana. Un’espressione alterata delle proteine della famiglia D52 è frequentemente osservata in contesti proliferativi e metabolici, rendendo Tpd52l2 un nodo utile per studiare la deregolazione del controllo del ciclo cellulare e il rimodellamento adattativo allo stress. Nei sistemi murini, Tpd52l2 rappresenta un bersaglio maneggevole per analizzare come le proteine associate al traffico modifichino l’output della segnalazione e l’omeostasi tissutale in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO D54 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpd52l2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpd52l2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpd52l2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina D54.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpd52l2 per lo studio della segnalazione di D54, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpd52l2 critici per la funzione di D54
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpd52l2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal D54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal D54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpd52l2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal D54 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR D54 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpd52l2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpd52l2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.