D1DR/Dopamine Receptor D1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400532-ACT

DRD1 codifica o receptor de dopamina D1 (D1DR), um receptor acoplado à proteína G (GPCR) que se acopla principalmente a Gαs/olf para estimular a adenilil ciclase, elevar o cAMP intracelular e ativar cascatas de sinalização dependentes de PKA. Em neurônios, a sinalização do D1DR modula a excitabilidade de membrana, a plasticidade sináptica e programas de expressão gênica por meio de efetores a jusante, incluindo CREB e DARPP-32, integrando o tônus dopaminérgico à função em nível de circuitos. O DRD1 participa de vias mediadas por dopamina que moldam recompensa, motivação e controle motor, e alterações na expressão do receptor ou na dinâmica de sinalização são frequentemente investigadas em contextos de pesquisa sobre transtornos neuropsiquiátricos e do movimento. Como receptor de membrana com expressão rigidamente regulada, o DRD1 é um alvo útil para estudar dessensibilização de GPCR, tráfego de receptores e crosstalk com outros sistemas neuromodulatórios.

D1DR/Dopamine Receptor D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DRD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

D1DR/Dopamine Receptor D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DRD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DRD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de D1DR/Dopamine Receptor D1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DRD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de D1DR/Dopamine Receptor D1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via D1DR/Dopamine Receptor D1 em células tumorais com expressão de DRD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.