cytoglobin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402949-ACT

Il gene umano **CYGB** codifica per la citoglobina, una proteina della famiglia delle globine che lega l’eme e contribuisce alla gestione dell’ossigeno a livello cellulare e all’omeostasi redox. **CYGB** è implicato nella regolazione del metabolismo dell’ossido nitrico, nella limitazione delle specie reattive dell’ossigeno e nel supporto di programmi di sopravvivenza durante ipossia e stress ossidativo, attraverso vie che intersecano la segnalazione **HIF** e reti trascrizionali sensibili allo stress. L’espressione è stata riportata in molteplici tessuti e tipi cellulari, con ruoli dipendenti dal contesto nell’attivazione dei fibroblasti, nella biologia vascolare e nell’adattamento cellulare allo stress metabolico. Un’attività o un’espressione deregolata di **CYGB** è stata associata a fenotipi legati a infiammazione e fibrosi ed è stata studiata anche in ambito oncologico, dove l’equilibrio tra ossigeno e stato redox influenza proliferazione, invasione e meccanismi di risposta alle terapie.

cytoglobin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYGB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cytoglobin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYGB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYGB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cytoglobin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYGB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cytoglobin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cytoglobin nelle cellule tumorali con espressione di CYGB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.