CTRL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410749

Panoramica

CTRL (chymotrypsin-like) codifica una proteasi serinica che partecipa al processamento proteolitico delle proteine alimentari e contribuisce alla più ampia rete degli enzimi digestivi. In quanto membro della famiglia delle peptidasi tipo tripsina, l’attività di CTRL è riconducibile alla proteolisi extracellulare e può essere considerata nell’ambito di vie che regolano l’attivazione delle proteasi, il turnover dei substrati e la modulazione da parte di inibitori endogeni delle proteasi. Le variazioni nell’espressione o nell’attività delle proteasi digestive vengono frequentemente valutate in studi di biologia pancreatica e gastrointestinale, inclusi i meccanismi che influenzano la secrezione enzimatica, l’attivazione degli zimogeni e la proteostasi mucosale. Questi contesti rendono CTRL un utile nodo molecolare per indagare come i microambienti dipendenti dalle proteasi influenzino la segnalazione cellulare e la fisiologia dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTRL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CTRL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CTRL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CTRL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTRL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CTRL per lo studio della segnalazione di CTRL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CTRL critici per la funzione di CTRL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CTRL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTRL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CTRL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CTRL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTRL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CTRL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CTRL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CTRL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.