CtBP2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-401865-LAC-2

O gene humano CTBP2 codifica a proteína de ligação ao terminal C 2 (CtBP2), um correpressor transcricional sensível a NADH que atua predominantemente como correpressor ao se associar a fatores de transcrição específicos de sequência e a enzimas modificadoras de cromatina para regular programas de expressão gênica. A CtBP2 integra o estado metabólico ao controle epigenético por meio do recrutamento de desacetilases de histonas e de outros complexos de remodelamento, influenciando processos como a transição epitélio–mesênquima, a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a transcrição associada a sinapses neuronais (incluindo funções ligadas à isoforma CtBP2/RIBEYE). A desregulação de redes transcricionais dependentes de CTBP2 tem sido associada à progressão tumoral e à biologia da metástase, bem como a fenótipos do neurodesenvolvimento e do sistema sensorial, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos. A edição gênica de CTBP2 permite a investigação funcional de circuitos de repressão transcricional, o mapeamento de dependências de interações proteína–proteína e a dissecação de efeitos regulatórios gênicos específicos de vias em modelos celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais CtBP2 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CTBP2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CtBP2 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CTBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CtBP2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CTBP2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.