CT45-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416782-ACT

CT45A1は、正常な成人組織では発現が極めて限定される一方で、さまざまな腫瘍環境で高頻度に再発現するがん／精巣抗原CT45-1をコードしています。この特徴により、エピジェネティックな制御破綻や、本来その系譜では起こらない転写（系譜不適切な転写）を研究するうえで有用なマーカーとなります。分子機能の詳細はなお完全には解明されていないものの、CT45-1は細胞の可塑性やストレス適応状態に関連する転写プログラムと結び付けられており、がん遺伝子シグナル下での増殖や生存を支えるプロセスにも関与するとされています。CT45A1の異常発現は、腫瘍の免疫原性や不均一性と関連することが多く、クロマチン状態の変化を反映する他の生殖細胞系列に限定された抗原と併せて研究されることも少なくありません。これらの特性から、CT45A1／CT45-1は、クロマチンリモデリング、転写制御、腫瘍関連抗原発現を結び付ける制御回路を解析するうえで重要な対象となります。

CT45-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CT45A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CT45-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CT45A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCT45A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CT45-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCT45A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCT45-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCT45A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCT45-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。