CstF-64 Plasmide Double Nickase (h): sc-402202-NIC

CSTF2 codifica la subunità da 64 kDa del fattore di stimolazione del taglio (CstF-64), un componente essenziale legante l’RNA del macchinario di processamento dell’estremità 3′ del pre-mRNA. CstF-64 riconosce elementi di sequenza a valle ricchi in GU e coopera con CPSF e altri fattori per promuovere il taglio endonucleolitico e la poliadenilazione, influenzando così la stabilità dei trascritti, la traduzione e i programmi di espressione genica. Agendo sulla scelta dei siti di poliadenilazione alternativi, CSTF2 contribuisce a regolare la lunghezza della 3′ UTR e il controllo post-trascrizionale in contesti proliferativi e di risposta allo stress. Un processamento deregolato dell’estremità 3′ e la poliadenilazione alternativa sono spesso associati a firme di espressione genica oncogeniche e ad altre alterazioni del trascrittoma rilevanti per la malattia, rendendo CSTF2 un bersaglio prezioso per studi meccanicistici sulla maturazione dell’RNA.

CstF-64 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSTF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSTF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSTF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSTF2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.