Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432122-ACT

O gene **Nlrp3** em camundongos codifica a criopirina (NALP3/NLRP3), um receptor citosólico de reconhecimento de padrões que nucleia o inflamassoma NLRP3 em resposta a diversos sinais de perigo, como fluxo iônico, estresse mitocondrial e dano lisossomal. A montagem do inflamassoma promove a ativação da caspase-1 dependente de ASC, levando à maturação e liberação de IL-1β e IL-18 e à indução de morte celular piroptótica. A sinalização de NLRP3 integra o reconhecimento imune inato com o “priming” mediado por NF-κB e redes de citocinas a jusante, que moldam a ativação mieloide, a inflamação tecidual e a defesa do hospedeiro. A atividade desregulada de NLRP3 é amplamente usada como eixo mecanístico para modelar fenótipos autoinflamatórios e contribuições inflamatórias para processos de doenças metabólicas, neuroinflamatórias e cardiovasculares em camundongos.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nlrp3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nlrp3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nlrp3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cryopyrin/NALP3/NLRP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nlrp3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cryopyrin/NALP3/NLRP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cryopyrin/NALP3/NLRP3 em células tumorais com expressão de Nlrp3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.