CRP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409601-ACT

CSRP2は、システインおよびグリシンに富むタンパク質2（CRP2）をコードします。CRP2はLIMドメインを有するアダプタータンパク質で、アクチン細胞骨格の構築と、細胞形態・運動性・分化に関連する転写プログラムの制御を協調させます。CRP2は平滑筋関連の状況で高発現しており、細胞骨格ダイナミクスを核内の遺伝子制御へと結び付けることでメカノトランスダクションに関与します。これには、SRF/MRTF経路やその他の転写コレギュレーターが関与する経路も含まれます。これらの機能を通じて、CSRP2は血管リモデリングや細胞遊走の表現型に影響し、線維化、心血管生物学、がんに関連する間質反応および転移過程などに関わることが示唆されます。CSRP2の発現異常は複数の疾患データセットで報告されており、細胞骨格シグナル伝達と遺伝子制御回路を研究するための機構的ハブとしての有用性を裏付けています。

CRP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CSRP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CRP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CSRP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCSRP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CRP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCSRP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCRP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCSRP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCRP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。