CRM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400348-ACT

O XPO1 humano codifica a exportina CRM1, um receptor de exportação nuclear da família das carioferinas-β que se liga a sinais de exportação nuclear ricos em leucina e medeia o transporte dependente de RanGTP de proteínas e RNAs do núcleo para o citoplasma. A CRM1 regula o tráfego nucleocitoplasmático de fatores-chave do ciclo celular e da resposta ao estresse, modulando vias como a sinalização de p53, a regulação de NF-κB, a sinalização de MAPK e a biogênese de ribossomos. Ao controlar a localização subcelular de fatores de transcrição e supressores tumorais, o XPO1 influencia a proliferação, a integridade do genoma e a proteostase. A atividade desregulada de XPO1/CRM1 e programas alterados de exportação nuclear são frequentemente associados a estados de sinalização oncogênica e a outras doenças caracterizadas por respostas celulares ao estresse perturbadas.

CRM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XPO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XPO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XPO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XPO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRM1 em células tumorais com expressão de XPO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.