CPEB Plasmide Double Nickase (h): sc-402685-NIC

CPEB1 codifica la proteina legante l’elemento di poliadenilazione citoplasmatica (CPEB), un regolatore che si lega all’RNA e controlla la lunghezza della coda poli(A) degli mRNA e la tempistica della traduzione riconoscendo gli elementi di poliadenilazione citoplasmatica nelle regioni 3′ UTR. Coordinando la traduzione dipendente dalla poliadenilazione, CPEB1 contribuisce a programmi di regolazione genica post-trascrizionale che modellano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la plasticità sinaptica neuronale. L’attività di CPEB1 si interfaccia con vie di segnalazione che modulano la dinamica dei granuli di RNA e la traduzione locale, influenzando il rimodellamento del proteoma in risposta a segnali di sviluppo e di stress. Una disregolazione del controllo traduttivo mediato da CPEB1 è stata associata ad alterazioni degli stati di proliferazione e differenziazione ed è stata studiata nel contesto della biologia del cancro e della neurobiologia, ambiti in cui la regolazione dell’RNA risulta spesso perturbata.

CPEB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPEB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPEB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPEB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPEB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.