Coronin 1A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403011-ACT

Il gene umano **CORO1A** codifica la coronina 1A, una proteina con ripetizioni WD che si lega all’actina, arricchita nelle cellule ematopoietiche e coinvolta nella regolazione del rimodellamento del citoscheletro, della migrazione cellulare e della dinamica della sinapsi immunologica. La coronina 1A coordina eventi di segnalazione actina-dipendenti a valle dei recettori dell’antigene e di stimoli chemiotattici (chemochine), influenzando il traffico vescicolare, i flussi di calcio e le vie di sopravvivenza nei leucociti. Alterazioni dell’espressione o della funzione di **CORO1A** sono state associate a disregolazione immunitaria, inclusi difetti nell’omeostasi delle cellule T e una maggiore suscettibilità alle infezioni, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi infiammatori e legati alle immunodeficienze. In quanto regolatore connesso al citoscheletro, **CORO1A** è anche utilizzato come nodo per collegare la dinamica dell’actina alle reti di segnalazione che controllano l’attivazione e la motilità dei linfociti.

Coronin 1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CORO1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Coronin 1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CORO1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CORO1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Coronin 1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CORO1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Coronin 1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Coronin 1A nelle cellule tumorali con espressione di CORO1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.