CLK4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419690

Panoramica

Clk4 codifica la CDC-like kinase 4 (CLK4), una chinasi a doppia specificità che fosforila i fattori di splicing ricchi in serina/arginina (SR) e contribuisce a coordinare lo splicing del pre-mRNA con i programmi trascrizionali. Modulando l’attività delle proteine SR, CLK4 partecipa a scelte di splicing alternativo che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione genica in risposta allo stress. La segnalazione della famiglia CLK interagisce con reti di processamento dell’RNA che plasmano la diversità del proteoma, e un’alterata regolazione dello splicing è comunemente associata, nei modelli sperimentali, alla trasformazione oncogenica e a fenotipi neuroevolutivi. Nei sistemi murini, perturbare Clk4 offre un approccio gestibile per analizzare come le dinamiche di fosforilazione associate allo spliceosoma influenzino isoforme trascrittomiche specifiche di tessuto e i conseguenti output delle vie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLK4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clk4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clk4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clk4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLK4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clk4 per lo studio della segnalazione di CLK4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Clk4 critici per la funzione di CLK4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clk4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CLK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CLK4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clk4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CLK4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CLK4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clk4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clk4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.