CLK4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404084-ACT

A quinase 4 semelhante à CDC (CLK4) é uma quinase de dupla especificidade serina/treonina que fosforila fatores de splicing do tipo SR, conectando sinais de sinalização a decisões de splicing alternativo do pré‑mRNA. Como parte do eixo regulatório CLK/SRPK, a CLK4 ajuda a controlar a dinâmica do spliceossomo, a inclusão de éxons e o equilíbrio de isoformas de transcritos, moldando assim programas de expressão gênica que influenciam a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse. O splicing desregulado e a atividade alterada da família CLK têm sido associados à remodelação transcricional oncogênica e a outros fenótipos relevantes para doenças em células humanas. O estudo da função de CLK4 sustenta análises mecanísticas de vias de processamento de RNA e de suas contribuições para mudanças no estado celular.

CLK4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLK4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLK4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLK4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLK4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLK4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLK4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLK4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLK4 em células tumorais com expressão de CLK4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.