CLIC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409129-ACT

CLIC2（chloride intracellular channel 2）は、細胞内の塩化物イオン伝導や酸化還元感受性の膜結合に関与するCLICファミリーの一員であり、エンドメンブレン系コンパートメント間のイオン恒常性の維持を支えています。また、リアノジン受容体依存性のCa²⁺放出の調節や、興奮性、分泌、ストレス応答に影響するより広範なカルシウムシグナル伝達ダイナミクスとの関連も示されています。ヒト組織では、CLIC2の発現は心血管系および神経系の文脈で高く、筋や神経の生理機能における役割と整合的です。CLIC2の機能または発現の変化は、神経発達に関わる表現型や心機能障害と関連づけられており、イオンチャネル調節やシグナル伝達ネットワークの機構研究において重要な標的となります。

CLIC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLIC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLIC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLIC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLIC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLIC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLIC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLIC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLIC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLIC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。