CLCA2 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-404824-ACT-2

ヒトCLCA2（chloride channel accessory 2）は、塩化物コンダクタンスおよび上皮のイオン輸送の制御に関与するとされる細胞表面／分泌型のアクセサリータンパク質をコードしており、膜動態やバリア機能に関連する生理機構にも役割を担う。CLCA2の発現は分化やストレス応答性プログラムとしばしば結び付けられ、細胞—細胞接着、遊走、上皮恒常性に影響するシグナル伝達過程と交差することが示唆されている。CLCA2の発現異常（ディスレギュレーション）は、複数のがん種やその他の上皮性疾患の文脈で報告されており、腫瘍関連の表現型転換や微小環境応答を研究するための分子マーカーとしての有用性を支持する。CLCA2の遺伝子編集により、ヒト細胞モデルにおける塩化物関連シグナル、上皮リモデリング、ならびに下流の転写ネットワークを機序的に検証することが可能となる。

CLCA2 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLCA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLCA2 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CLCA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLCA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLCA2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLCA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLCA2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLCA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLCA2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。