Plásmido Doble Nickase (m) claudin-1: sc-419682-NIC

Cldn1 codifica la claudina-1, una proteína transmembrana de cuatro pasos de las uniones estrechas (tight junctions) que ayuda a establecer la función de barrera epitelial y endotelial al regular la permeabilidad paracelular y la polaridad apicobasal. La claudina-1 participa en el ensamblaje y la remodelación de las uniones estrechas mediante interacciones con proteínas de andamiaje como ZO-1, y se integra en redes de señalización que coordinan la estabilidad de las uniones, incluida la fosforilación dependiente de PKC y la comunicación cruzada con Wnt/β-catenina y programas relacionados con la EMT. En tejidos de ratón, la claudina-1 es destacada en epitelios formadores de barrera, donde sus niveles de expresión influyen en la integridad de las uniones, la diferenciación y las respuestas inflamatorias. La expresión alterada de CLDN1 se ha asociado con disfunción de barrera y con fenotipos de progresión tumoral vinculados a la EMT y al potencial metastásico, lo que la convierte en una diana útil en modelos de homeostasis epitelial y mecanismos de enfermedad.

claudin-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cldn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cldn1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cldn1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cldn1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.