Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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citrate synthase Double Nickaseプラスミド (h): sc-402227-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- citrate synthase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- citrate synthaseダブルニカースプラスミド（h）およびcitrate synthaseダブルニカースプラスミド（h2）は、CSを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: citrate synthase 抗体 (G-3): sc-390693
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
citrate synthase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402227-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
citrate synthase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402227-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのCSはクエン酸シンターゼをコードしており、ミトコンドリア・マトリックスに存在する酵素として、オキサロ酢酸とアセチルCoAの縮合反応を触媒してクエン酸を生成し、トリカルボン酸（TCA）回路へのフラックスを開始します。酸化的代謝への流入を制御することで、クエン酸シンターゼは電子伝達系のためのNADH/FADH2産生を支えるとともに、炭水化物・脂質・アミノ酸代謝をつなぐアナプレロシス／カタプレロシスにも影響します。CS活性はミトコンドリアのバイオエネルギー、レドックス恒常性、さらに脂肪酸およびステロール合成などのクエン酸依存的な生合成過程と交差します。TCA回路機能を含むミトコンドリア代謝の変化は、代謝調節異常、神経変性、ならびにミトコンドリア容量や基質利用が再構築される増殖性表現型などの文脈で、しばしば検討されています。
citrate synthase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。