CIITA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401762-ACT

ヒトCIITA（class II major histocompatibility complex transactivator）は、MHCクラスII遺伝子およびそれに関連する抗原プロセシング構成要素の誘導性発現を統括する、マスター転写調節因子である。CIITAは、インターフェロン駆動性シグナル伝達を含むサイトカインや自然免疫由来の刺激の下流で機能し、抗原提示、獲得免疫のプライミング、ならびに細胞種特異的な免疫応答性を制御する転写プログラムを統合する。CIITA活性が破綻すると、免疫監視や炎症性シグナル伝達が変化し、抗原提示異常、自己免疫に関連する遺伝子発現パターン、腫瘍の免疫回避機構などとの関連が示唆される。CIITAはDNAに直接結合しない共活性化因子としてMHC IIプロモーター上でエンハンソソーム複合体の形成を促進するため、多様な細胞モデルにおいてHLA遺伝子座の転写制御や免疫表現型リモデリングの解析に広く利用されている。

CIITA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CIITAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CIITA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CIITA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCIITA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CIITAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCIITA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCIITA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCIITA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCIITA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。