ChREBP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401803-ACT

Il gene umano **MLXIPL** codifica la **carbohydrate-responsive element-binding protein (ChREBP)**, un fattore di trascrizione sensibile al glucosio che forma un eterodimero con **MLX** e si lega agli **elementi di risposta ai carboidrati** per regolare i geni coinvolti nella **glicolisi**, nella **lipogenesi de novo** e nel **metabolismo dei trigliceridi**. L’attività di ChREBP è modulata da segnali nutrizionali e ormonali e integra la segnalazione derivante dal metabolismo del glucosio con programmi trascrizionali nel **fegato**, nel **tessuto adiposo** e nelle **isole pancreatiche**. Un’alterata regolazione della via **MLXIPL/ChREBP** è associata al rimodellamento metabolico osservato nella **resistenza all’insulina**, nella **steatosi epatica non alcolica** e in fenotipi più ampi legati all’omeostasi lipidica. In quanto nodo centrale della trascrizione responsiva ai nutrienti, ChREBP è ampiamente studiata per i suoi effetti sull’equilibrio energetico cellulare, sullo stato redox e sui flussi metabolici.

ChREBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MLXIPL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ChREBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MLXIPL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MLXIPL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ChREBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MLXIPL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ChREBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ChREBP nelle cellule tumorali con espressione di MLXIPL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.