ChM-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403523

Panoramica

CNMD codifica la condromodulina-1 (ChM-1), una glicoproteina secreta di origine cartilaginea implicata nel mantenimento del microambiente avascolare della cartilagine, attraverso la modulazione del comportamento delle cellule endoteliali e dell’omeostasi della matrice extracellulare. ChM-1 è associata ai programmi di differenziamento condrogenico e ai processi di rimodellamento tissutale che coordinano la deposizione della matrice, l’adesione cellulare e la segnalazione locale dei fattori di crescita nei tessuti muscoloscheletrici. Un’alterata espressione di CNMD è stata riportata in contesti di degenerazione e riparazione della cartilagine, a sostegno del suo impiego come punto di ingresso molecolare per lo studio della biologia osteoarticolare. Inoltre, l’attività di CNMD/ChM-1 è rilevante nelle ricerche sulla soppressione dell’angiogenesi e sulla segnalazione regolata dalla matrice nello sviluppo e nel rimodellamento tissutale associato a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ChM-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNMD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNMD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNMD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ChM-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNMD per lo studio della segnalazione di ChM-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CNMD critici per la funzione di ChM-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNMD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ChM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ChM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNMD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ChM-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ChM-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNMD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNMD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.