Chk1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400223-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Chk1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Chk1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Chk1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CHEK1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Chk1 Anticorpo (G-4): sc-8408
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Chk1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Chk1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK1 codifica a quinase 1 do checkpoint (Chk1), uma quinase de serina/treonina que coordena a resposta a danos no DNA e a sinalização de estresse de replicação para preservar a estabilidade do genoma. Ativada principalmente a jusante de ATR, a Chk1 fosforila substratos como as fosfatases CDC25 para restringir a atividade de CDK, impor os checkpoints de S e de G2/M e estabilizar forquilhas de replicação estagnadas. Por meio dessas funções, CHEK1 integra a progressão do ciclo celular às vias de reparo do DNA, incluindo a recombinação homóloga e mecanismos de proteção da forquilha. A sinalização desregulada de Chk1 é frequentemente associada à tolerância ao estresse de replicação e à instabilidade cromossômica observadas em múltiplos tipos de câncer, tornando-a um alvo amplamente estudado na biologia do estresse oncogênico.
Chk1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHEK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHEK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHEK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHEK1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.