CHD7 Plasmide Double Nickase (m): sc-435822-NIC

Chd7 codifica CHD7, un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente della famiglia CHD che regola l’accessibilità degli enhancer e i programmi trascrizionali durante lo sviluppo embrionale e la definizione dei pattern tissutali. Nelle cellule murine, CHD7 influenza la specificazione di linea e le decisioni sul destino cellulare coordinando il posizionamento dei nucleosomi con il legame dei fattori di trascrizione in vie che controllano la cresta neurale, la neurogenesi e lo sviluppo degli organi sensoriali. Un’alterazione della funzione di CHD7 compromette l’organizzazione della cromatina e le reti di espressione genica, rendendolo un modello ampiamente utilizzato per lo studio di sindromi dello sviluppo e dei meccanismi alla base dei fenotipi congeniti. CHD7 interagisce inoltre con processi più ampi di regolazione epigenetica, inclusi la comunicazione tra promotori ed enhancer e il controllo dell’allungamento trascrizionale.

CHD7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Chd7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Chd7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Chd7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Chd7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.