Centrin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404287-ACT

O CETN1 humano codifica a centrina-1, uma proteína conservada de ligação ao cálcio do tipo EF-hand que se associa a centrossomos e corpos basais para apoiar a biogênese de centríolos, a duplicação do centrossomo e a organização de microtúbulos. Por meio de interações com estruturas de suporte do centrossomo e de alterações conformacionais dependentes de cálcio, a centrina-1 contribui para a progressão do ciclo celular e para a fidelidade da montagem do fuso mitótico. A desregulação do número de centríolos e da função do centrossomo está associada à instabilidade cromossômica e a alterações na ciliogênese, tornando o CETN1 relevante para estudos de manutenção do genoma e sinalização proliferativa. O CETN1 também é frequentemente investigado no contexto de programas de expressão restritos a tecidos e de padrões anômalos de expressão observados na biologia do câncer e na regulação do desenvolvimento.

Centrin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CETN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Centrin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CETN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CETN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Centrin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CETN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Centrin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Centrin-1 em células tumorais com expressão de CETN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.