CEL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403176-ACT

Il gene umano **CEL** codifica la lipasi carbossil-estere, un enzima lipolitico secreto noto soprattutto per l’idrolisi degli esteri del colesterolo e dei trigliceridi nel lume intestinale e per il suo contributo all’assorbimento dei lipidi alimentari. L’attività di CEL si intreccia con i processi di traffico lipidico e rimodellamento delle lipoproteine che influenzano l’omeostasi del colesterolo cellulare e la segnalazione metabolica. La sua espressione è stata descritta anche nel tessuto acinare pancreatico e nel latte, collegando CEL alla fisiologia digestiva e alla gestione dei nutrienti in diversi contesti dello sviluppo. La variabilità genetica o un’espressione deregolata di CEL è stata associata a fenotipi di metabolismo lipidico alterato e a disfunzioni pancreatiche, offrendo un punto d’ingresso meccanicistico per studi sulle vie metaboliche ed esocrine.

CEL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEL nelle cellule tumorali con espressione di CEL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.